體外消化率法之所以用于環(huán)保飼料的開發(fā)，是因?yàn)樵摲椒茉谳^短時(shí)間內(nèi)了解飼料原料的消化率數(shù)值，并能模擬每種魚類的腸道環(huán)境，對單一飼料進(jìn)行消化率數(shù)值的測定，因而能較準(zhǔn)確的判斷出魚類對具體的某種飼料原料的消化吸收情況，從而很好的指導(dǎo)飼料配方，為優(yōu)質(zhì)環(huán)保飼料的開發(fā)提供最直接的參考數(shù)據(jù)。下面將體外消化率法的一些內(nèi)容簡單介紹如下，并附帶介紹一下我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
1、體外消化率測定方法的原理
體外消化率測定方法的飼料樣品在酶的作用下將不溶性的大分子物質(zhì)（如不溶性蛋白質(zhì)、淀粉等）降解為可溶性的小分子物質(zhì)（如肽、氨基酸、糊精、葡萄糖等），在體內(nèi)這些降解產(chǎn)物可被動(dòng)物消化道吸收進(jìn)入體內(nèi)，在離體條件下，這些物質(zhì)可溶解于水中，最后，以產(chǎn)生的可溶解物質(zhì)量占飼料樣品未消化前的百分比表示消化率的大小。
2、酶選擇
在體外消化率的初期，為篩選消化率高的飼料原料。一般采用多酶片作為體外消化率的主要用酶；在體外消化率的中后期，主要是通過提取魚類腸道（有胃魚類可采用胃部粗酶液一腸道粗酶液兩步酶解法，而對于無胃魚類，則可用腸道粗酶液）消化酶來進(jìn)行體外消化率的實(shí)驗(yàn)，以確定不同魚類對原料消化吸收情況的差異，從而篩選出魚類對不同原料的消化吸收數(shù)值，并依據(jù)動(dòng)物性飼料與植物性飼料的分類體系（動(dòng)物性飼料在我們進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中其數(shù)值與植物性飼料相比明顯偏低，然而在實(shí)際應(yīng)用中我們往往認(rèn)為動(dòng)物性飼料比植物性飼料更易被動(dòng)物消化吸收，即動(dòng)物性飼料的氨基酸平衡要好于植物性飼料，故我們按照植物性與動(dòng)物性飼料分類，把它們的消化率進(jìn)行縱向比較，而不進(jìn)行橫向比較）對常用飼料原料進(jìn)行體外消化率數(shù)值由低到高排列，從而為飼料配方時(shí)飼料原料的優(yōu)先選擇及飼料原料的用量比例提供參考。
3、實(shí)驗(yàn)方法
3.1腸道粗酶液法
3.1.1腸道粗酶液的提取
(1)解剖正常吃食的元胃活魚，取魚體全部腸道，將腸道內(nèi)容物擠凈、剪開，并用濾紙吸干腸道內(nèi)外水分，稱重并記錄。
(2)將腸道剪碎，加入10倍（重量體積比）冷卻的磷酸緩沖溶液，放人組織勻漿機(jī)（或玻璃勻漿器）中勻漿。
(3)將勻漿好的腸道液無損轉(zhuǎn)移到離心機(jī)中，在3000r/m轉(zhuǎn)速下，離心15分鐘，取上清液，此為腸道粗酶液。
3.1.2樣品消化
(1)樣品的粉碎：欲消化的樣品應(yīng)通過40目金屬篩。
(2)稱樣：稱取需消化的飼料原料或成品0.5—1.0克（視樣品蛋白含量的高低，高則少稱，低則多稱），無損失地轉(zhuǎn)入15ml已知重量的離心管中。每個(gè)樣品做2～3個(gè)平行。
(3)混合i準(zhǔn)確吸取lOml腸道粗酶液，轉(zhuǎn)入需加酶液的離心管中，蓋上管塞，并充分混勻。
(4)消化：將上述已加好酶液的離心管，放到36℃的恒溫振蕩器中，振蕩頻率控制在125次／分左右。每隔30～40分鐘將每個(gè)消化管拿出來手工振蕩一次。消化時(shí)間在12～14小時(shí)（低蛋白樣品需要時(shí)間短，高蛋白樣品需要時(shí)間長）。
(5)洗滌：將消化好的樣品離心(轉(zhuǎn)速300JOr/m)15分鐘，棄去上清液，在36℃的蒸餾水洗滌2～3次。
(6)烘干：將沖洗干凈的消化好的樣品，放入烘箱中烘干，烘箱溫度控制在75～850C，直至烘至恒重。稱重并記錄。
3.1.3測定
(1)用凱氏定氮法測定消化前及消化后樣品的粗蛋白含量，記錄測定數(shù)值。
備注：空白消化率是指在樣品中加入煮沸酶液進(jìn)行體外消化的消化率數(shù)值，計(jì)算方法同上。
3.2多酶片法
多酶片法比較簡單，將多酶片粉碎后直接加緩沖液并進(jìn)行離心即可制得酶液，其它操作同腸道粗酶液法。
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
我們目前已進(jìn)行了常用原料的多酶片篩選實(shí)驗(yàn)與部分魚類的體外消化率實(shí)驗(yàn)，下面僅介紹一下我們用多酶片法測定的部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5、討論
多酶片篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果可用于對原料的篩選上，例如我們通過大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)進(jìn)口魚粉的體外消化率在88%左右，而優(yōu)質(zhì)國產(chǎn)魚粉的消化率在82%左右，于是我們可以制定出標(biāo)準(zhǔn)魚粉樣，然后拿其它的魚粉樣與之一起進(jìn)行體外消化率數(shù)值的對比測定，這樣就可以淘汰不合格原料。另外我們用提取的魚腸道粗酶液對常用水產(chǎn)飼料原料魚粉、棉粕、豆粕、菜粕等11種原料進(jìn)行體外消化試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這些原料的體外消化率值比用體內(nèi)消化法測定結(jié)果低，這可能是因?yàn)轶w外與體內(nèi)的消化環(huán)境有差異。體內(nèi)消化時(shí)，未被消化的食物團(tuán)到達(dá)腸道的某一部位，刺激該部位消化酶陸續(xù)釋放，而體外消化無法滿足這一條件。但從總體上看，體內(nèi)消化法測定的值與體外消化法測定的值有一定的相關(guān)性。我們參照西南農(nóng)大葉元土教授的試驗(yàn)的數(shù)據(jù)，將用三氧化二鉻作為指示劑測定的上述飼料原料的表觀消化率與我們體外消化率測定結(jié)果相比。
由此可見體外消化率方法可以有效地評(píng)價(jià)不同水產(chǎn)飼料原料的品質(zhì)，且所需時(shí)間短，能夠在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成，相對于體內(nèi)消化率法能節(jié)省大量的物力與財(cái)力，故體外消化率測定方法在篩選水產(chǎn)飼料原料上有廣泛的應(yīng)用前景。
相關(guān)顆粒機(jī)壓塊機(jī)產(chǎn)品：
1、秸稈顆粒機(jī)
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